2020主管检验技师《微生物与寄生虫》知识点：支原体及检验

第二十四章　支原体及检验

　　概述

　　·支原体是一类无细胞壁、呈高度多形态性，能通过除菌滤器，在人工培养基上能生长繁殖的最小原核型微生物。

　　·支原体科分为支原体和脲原体两个属。在支原体属中，对人有致病性的主要为肺炎支原体、人型支原体、生殖道支原体;而脲原体属中，对人致病的有解脲脲原体。

　　生物学特性

　　·形态与结构　个体微小，大小约0.2～0.3μm，呈高度多形态。G-，但不易着色，常用吉姆萨染色。

　　·无细胞壁仅有细胞膜是与细菌区别的主要特点。支原体的细胞膜胆固醇类含量高。凡能作用于胆固醇的物两性霉素B、皂素及洋地黄苷均可破坏细胞膜致其死亡。

　　·抗原　细胞膜外层蛋白质是主要的特异性抗原，具有免疫源性。

　　·抵抗力　不耐热，45℃经15～30分钟或55℃经5～15分钟即告死亡。耐冷，不耐干燥。对一些化学物质敏感，容易被重金属盐类、苯酚、来苏儿等化学消毒剂灭活。

　　对抑制或影响蛋白合成的抗生素如四环素、红霉素等敏感。因无细胞壁，对渗透压敏感。对作用于细胞壁的抗生素，如青霉素、头孢菌素等不敏感。

　　·培养特性

　　大多数需氧或兼性厌氧，通常在含95%N2、5%CO2的微需氧环境中生长良好。

　　营养要求较高：需在含牛心浸液、马血清与酵母浸液等成分的培养基上生长。

　　菌落特征与细菌L型菌落极相似，37℃培养3～10d菌落呈“荷包蛋”样。两者不同点在于细菌L型在无抗生素等诱导因素作用下易返祖为原菌，而支原体不出现返祖现象。

　　·生化反应

　　常以发酵葡萄糖、水解精氨酸和尿素等生物学特性不同，作为初步鉴别支原体的依据。

　　四氮唑还原能力、亚甲蓝抑制、溶解红细胞、吸附红细胞等生物学特性不同，作为支原体进一步鉴别的依据。

　　微生物检验

　　由于支原体无固定形态，染色结果不易与标本中的组织碎片等杂物区别，故取患者标本直接镜检对各种支原体的诊断意义不大。微生物检验方法主要靠分离培养与血清学检验。

　　肺炎支原体——生物学特性

　　·形态与结构

　　形态：呈高度多形态，有球形、杆形、分支丝状等。

　　大小：个体微小。

　　染色：G-，不易着色，吉姆萨染色呈淡紫色。

　　特殊：无细胞壁是与细菌区别的主要特点。

　　·培养特性

　　营养要求：较高。

　　气体环境：需氧或兼性厌氧。

　　通常在含95%N2、5%CO2的微需氧环境中生长良好。

　　温度酸碱：最适pH7.6～8.0。

　　菌落特征：常以牛心消化液为基础另加20%小牛血清及新鲜酵母浸液制成液体或固体培养基。微需氧培养，初次分离需1～2周才长菌落。菌落常不出现“荷包蛋”样，需经数次传代后，菌落开始典型。

　　·抗原

　　细胞膜外层蛋白质是主要的特异性抗原。可将支原体分成若干血清型。

　　·抵抗力

　　耐冷，-70℃或液氮中可长期冻存。不耐干燥。对渗透压敏感，容易被消毒剂灭活。对作用于细胞壁的抗生素，如青霉素、头孢菌素等不敏感，对作用于核蛋白体，抑制或影响蛋白合成的抗生素如四环素、红霉素等敏感。

　　肺炎支原体——微生物检验

　　·标本采集：采集咽分泌物、痰、支气管分泌物、胸水等。

　　·形态学检查：意义不大。

　　·分离培养

　　生化反应：

　　(1)分解葡萄糖产酸不产气。

　　(2)氯化三苯基四氮唑(TTC)还原试验：使无色TTC还原为粉红色。

　　(3)生长抑制试验(GIT)和代谢抑制试验(MIT)。

　　(4)红细胞吸附试验：肺炎支原体的菌落能发生红细胞吸附。

　　·血清学试验

　　特异性血清学试验：

　　ELISA技术。

　　补体结合试验：诊断肺炎支原体常用的血清学方法。

　　间接血细胞凝集试验：主要检测IgM抗体。

　　非特异性血清学试验：冷凝集试验(一般血清滴度≥1:64即为阳性，病程中双份血清至少效价有4倍增长，近期感染可能性越大)。

　　·核酸检测：PCR试验快速检测。

　　肺炎支原体——致病性及临床意义

　　肺炎支原体可从口腔、呼吸道分离到，主要通过飞沫传播，是人类原发性非典型性肺炎的主要病原体之一。儿童和青年易感，首先引起上呼吸道感染，然后下行引起肺炎、支气管炎。

　　解脲脲原体——生物学特性

　　·形态与结构

　　形态：呈高度多形态，有球形、杆形、分支丝状等。

　　大小：个体微小。

　　染色：G-，不易着色，吉姆萨染色呈紫蓝色。

　　特殊：无细胞壁是与细菌区别的主要特点。

　　·培养特性

　　营养要求：较高。

　　气体环境：需氧或兼性厌氧。

　　通常在微需氧环境中生长良好。

　　温度酸碱：最适pH为5.5～6.5。

　　菌落特征：生长较快。

　　·含酚红、尿素及血清的液体培养基内：微需氧环境中37℃孵育，1～2d内即可出现生长现象。再转种固体培养基48h可形成“荷包蛋”样菌落。

　　解脲脲原体——微生物检验

　　·标本采集：采集如尿液、前列腺液、精液、阴道分泌物等。

　　·形态学检查：意义不大。

　　·分离培养

　　生化反应：

　　(1)不能利用葡萄糖和精氨酸，但可利用尿素作为能源，分解尿素产碱。

　　(2)生长抑制试验(GIT)和代谢抑制试验(MIT)。

　　·血清学试验：意义不大。

　　·核酸检测：快速、敏感、稳定、可靠。

　　解脲脲原体——致病性及临床意义

　　·解脲脲原体是人类生殖道最常见的寄生菌之一，在特定的环境下可以致病。主要通过性行为传播，是非淋菌性尿道炎的主要病原体之一。若上行感染，还可引起男性和女性的其他泌尿生殖道炎症。

　　·解脲脲原体还可通过垂直传播，引起新生儿，特别是早产儿，呼吸道感染和中枢神经系统感染。

　　人型支原体

　　·形态结构与解脲脲原体相似。

　　·能分解精氨酸产NH3，不分解尿素和葡萄糖。

　　·在液体培养基中因分解精氨酸产氨，pH增至7.8以上，易死亡。在固体培养基上菌落大小为40～60um，个别菌落达100～200um，呈典型“油煎蛋”样。

　　·最常见的寄生部位是泌尿生殖道，通过性接触传播，可引起盆腔炎、输卵管炎、产后热、阴道炎、宫颈炎及肾盂肾炎等。

　　·感染胎儿和在分娩时感染婴儿，如脑膜炎、脑脓肿、硬脑膜下脓肿等，造成新生儿感染和死胎。

　　穿通支原体

　　·杆状或长烧瓶状。一端为尖形结构，具有黏附、穿入细胞的作用。

　　·营养要求高;生长较慢。在改良的SP-4培养基上生长，菌落呈“油煎蛋”样;在液体培养基上生长时，呈透明状。

　　·发酵葡萄糖，水解精氨酸，但不分解尿素。

　　·穿通支原体、发酵支原体、梨形支原体三种新支原体是加速AIDS进程的一个协同因子。

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