2019主管检验技师免疫学及其免疫检验提分强化题：酶免疫技术_第2页

　　答案部分

　　一、A1

　　1、

　　【正确答案】 A

　　【答案解析】 TMB是一种优于OPD的新型HRP色原底物。TMB经HRP作用后变为蓝色，加入硫酸终止反应后变为黄色，最大吸收峰波长为450nm。

　　2、

　　【正确答案】 E

　　【答案解析】 OPD被认为是HRP最为敏感的色原底物之一。OPD在HRP的作用下显橙黄色，加强酸如硫酸或盐酸终止反应后呈棕黄色，最大吸收峰在492nm波长。

　　3、

　　【正确答案】 B

　　【答案解析】 TMB是一种优于OPD的新型HRP色原底物。TMB经HRP作用后变为蓝色，加入硫酸终止反应后变为黄色，最大吸收峰波长为450nm。

　　4、

　　【正确答案】 B

　　【答案解析】 用于酶免疫技术的HRP，其RZ值应大于3.0。

　　5、

　　【正确答案】 E

　　【答案解析】 1.酶的活性要强，催化反应的转化率高，纯度高。

　　2.易与抗体或抗原偶联，标记后酶活性保持稳定，且不影响标记抗原与抗体的免疫反应性。

　　3.作用专一性强，酶活性不受样品中其他成分的影响，受检组织或体液中不存在与标记酶相同的内源性酶或抑制物。用于均相酶免疫测定的酶还要求当抗体与酶标抗原结合后，酶活性可出现抑制或激活。

　　4.酶催化底物后产生的产物易于判断或测量，方法简单易行、敏感和重复性好。

　　6、

　　【正确答案】 A

　　【答案解析】 酶免疫测定根据抗原抗体反应后是否需要分离结合的与游离的酶标记物而分为均相和异相这两类。

　　7、

　　【正确答案】 B

　　【答案解析】 酶增强免疫测定技术(EMIT)是均相酶免疫测定技术。EMIT的基本原理：半抗原与酶结合成酶标半抗原，保留半抗原和酶的活性，当酶标半抗原与抗体结合后，所标的酶与抗体密切接触，使酶的活性中心受到影响而活性被抑制，反应后酶活力大小与标本中的半抗原量呈一定的比例，从酶活力的测定结果可推算出标本中半抗原的量。

　　8、

　　【正确答案】 C

　　【答案解析】 均相酶免疫测定是将半抗原或小分子抗原如药物、激素、毒品、兴奋剂等与酶结合制成酶标记物，酶与抗原(半抗原)结合后仍保留酶和抗原(半抗原)的活性。均相酶免疫测定操作简便、快速、适合于自动化，应用广泛，不仅可检测药物、激素、毒品、兴奋剂等半抗原或小分子抗原，也可测定大分子蛋白质、病毒及细胞性抗原成分。

　　最大缺点是易受样品中非特异的内源性酶、酶抑制药及交叉反应物的干扰，而且由于采用竞争性结合分析原理，灵敏度不及异相酶免测定。

　　9、

　　【正确答案】 B

　　【答案解析】 在双位点一步法测定中，应注意钩状效应，类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象。当标本中待测抗原浓度相当高时，过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合，而不再形成夹心复合物，所得结果将低于实际含量。钩状效应严重时甚至可出现假阴性结果。

　　10、

　　【正确答案】 A

　　【答案解析】 许多化合物可作为HRP的供氧体，在ELISA中常用的供氢体底物为邻苯二胺(OPD)、四甲基联苯胺(FMB)和ABTS。OPD为在ELISA中应用最多的底物，灵敏度高，比色方便。

　　11、

　　【正确答案】 A

　　【答案解析】 制备抗体酶结合物的方法通常有戊二醛交联法、过碘酸盐氧化法和标记抗体鉴定法。

　　12、

　　【正确答案】 D

　　【答案解析】 斑点免疫层析试验以硝酸纤维素为载体，利用微孔滤膜的毛细管作用，滴加在膜条一端的液体慢慢向另一端渗移，犹如层析一般。

　　13、

　　【正确答案】 B

　　【答案解析】 化学发光是吸收了化学能使分子激发而发射的光，而荧光是吸收了光能使分子激发而发射的光。

　　14、

　　【正确答案】 C

　　【答案解析】 钩状效应即HOOK效应,是指由于抗原抗体比例不合适而导致假阴性的现象，其中抗体过量叫做前带效应;抗原过量叫做后带效应。在等价带前后分别为抗体、抗原过剩则影响沉淀物的形成，这种现象称为带现象。带现象在临床检验中经常出现，特别是ELISA反应中。出现在抗体过量时，称为前带，出现在抗原过剩时，称为后带。所以在临床工作中一定要注意前带和后带现象，以免出现假阴性结果，尤其以前带效应明显，这种情况可以通过进一步稀释样本进行解决。

　　15、

　　【正确答案】 A

　　【答案解析】 均相酶免疫测定方法有酶增强免疫测定技术(EMIT)和克隆酶供体免疫分析方法。其中，酶增强免疫测定技术是最早取得实际应用的酶免疫测定方法。

　　16、

　　【正确答案】 C

　　【答案解析】 间接法是检测抗体最常用的方法，其原理是利用酶标记的抗抗体以检测已与固相结合的受检抗体，只要更换不同的固相抗原，就可以用一种酶标抗体检测各种与抗原相应的抗体。

　　17、

　　【正确答案】 E

　　【答案解析】 免疫渗滤试验和免疫层析试验具有简便、快速、单份测定、可立等结果等优点，无需任何仪器设备，试剂稳定，因此多用于急诊检验。这类试验不能准确定量，所以主要限于检测正常体液中不存在的物质以及正常含量极低而在特殊情况下异常升高的物质。目前临床检验中已开展的项目有HCG、抗HCV和抗HIV、HBsAg等，新项目正在不断发展中。

　　18、

　　【正确答案】 D

　　【答案解析】 ELISA是在固相载体上包被抗原或抗体后，通过抗原抗体反应使酶标抗体(或酶标抗原)结合到载体上，经洗涤使结合的酶标抗体和游离的酶标抗体分离，洗去游离的酶标抗体(或酶标抗原)。在这种测定方法中有3种必要的试剂：①固相的抗原或抗体。②酶标记的抗原或抗体。③酶作用的底物。间接法和捕获法还使用稀释的血清标本做试剂。戊二醛是一种双功能团试剂，可以使酶与蛋白质或其他抗原的氨基通过它而耦联。与ELISA的方法相反。

　　19、

　　【正确答案】 E

　　【答案解析】 影响发光剂标记的因素有被标记蛋白的性质、原料比、标记率、温度。

　　20、

　　【正确答案】 B

　　【答案解析】 在ELISA中，常用的酶为辣根过氧化物酶(HRP)和碱性磷酸酶(AP)。应用AP系统，其敏感性一般高于应用HRP系统，空白值也较低。但由于AP较难得到高纯度制剂，稳定性较HRP低，价格较HRP高，制备酶结合物时得率较HRP低等原因，国内在ELISA中一般均采用HRP。

　　21、

　　【正确答案】 B

　　【答案解析】 酶免疫技术的主要试剂为固相的抗原或抗体、酶标记的抗原或抗体和与标记酶直接关联的酶反应底物。最常用的固相载体物质是聚苯乙烯。

　　22、

　　【正确答案】 C

　　【答案解析】 将抗原或抗体固相化的过程称为包被。由于载体的不同，包被的方法也不同。如以聚苯乙烯ELISA板为载体，通常将抗原或抗体溶于缓冲液(最常用的为pH9.6的碳酸缓冲液)中，加于ELISA板孔中在4℃过夜，经清洗后即可应用。如果包被液中的蛋白质浓度过低，固相载体表面有能被此蛋白质完全覆盖，其后加入的血清标本和酶结合物中的蛋白质也会部分地吸附于固相载体表面，最后产生非特异性显色而导致本底偏高。在这种情况下，如在包被后再用1%～5%牛血清白蛋白包被一次，可以消除这种干扰。这一过程称为封闭。包被好的ELISA板在低温可放置一段时间而不失去其免疫活性。

　　23、

　　【正确答案】 B

　　【答案解析】 酶联免疫吸附试验(ELISA)的位点一步法是在双抗体夹心法测定抗原时，如应用针对抗原分子上两个不同抗原决定簇的单克隆抗体分别作为固相抗体和酶标抗体，则可如图中所示，在测定时可使标本的加入和酶标抗体的加入两步并作一步。此法不但简化了操作，缩短了反应时间，如应用高亲和力的单克隆抗体，测定的敏感性和特异性也显著提高。单克隆抗体的应用使测定抗原的ELISA提高到新水平。

　　24、

　　【正确答案】 B

　　【答案解析】 ELISA抗体夹心法检测抗原A时，固相载体的包被物是未标记的抗A抗体。

　　二、B

　　1、

　　【正确答案】 C

　　【答案解析】 自身红细胞凝集试验可用于HIV抗体、HBsAg的检测，灵敏度与间接血凝试验相仿。

　　【正确答案】 A

　　【答案解析】 免疫印迹法在艾滋病病毒感染中作为确诊试验。

　　【正确答案】 E

　　【答案解析】 免疫组织化学技术是指酶标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应的抗原进行定性、定位和定量测定的一项技术。

　　【正确答案】 B

　　【答案解析】 检测抗原最常用的方法是ELISA(双抗体夹心法)。