2018年《临床检验初级技师》资格考试考点梳理（16）

1说明双缩脲法成为测定血清总蛋白参考方法的理由?并解释其标化法计算公式中的0.298是什么含义?

答：(1)我国卫生部医政司推荐的双缩脲法试剂配方是Doumas1981年推荐的优化配方，此配方的精密度和准确度优于其它生化专著中介绍的不同配方;本方法简便、准确、重复性好，试剂与蛋白质肽键反应专一，不受蛋白质分子量和氨基酸组成的影响，干扰因素较少，故成为公认的测定血清总蛋白的参考方法。

(2)Doumas等确定0.298为纯蛋白—双缩脲复合物的吸光系数。即按照Doumas的标准试剂配方，在波长540nm，比色杯光径1.0cm，分光光度计波长带宽≤2nm等标化条件下，双缩脲反应液中蛋白质浓度为1.0g/L时的吸光度。

2血清白蛋白溴甲酚绿(BCG)法为什么在反应5S时读取A值，而溴甲酚紫(BCP)法为什么定在60S以后?

答：因为血清白蛋白与BCG呈现即刻反应后反应液颜色即不再加深，但是所测定的血清样品中，除白蛋白外尚有相当数量的a1-抗胰蛋白酶、a1-酸性糖蛋白、转铁蛋白、触珠蛋白、c反应蛋白和铜蓝蛋白等所谓“慢反应蛋白质”，它们与BCG的反应要在15min甚至1h才能完成。为了防止这种非特异性反应的干扰，故将BCG法的读取A值时间定在5s(或10s)，这样所测得的结果与免疫火箭电泳法高度一致。

BCP试剂只与白蛋白反应，不与白蛋白以外的其它蛋白质显色。故此法测定A值的时间可放在呈色后1h以内，不影响测定值的准确性。

3何谓真血糖?判断一项血糖测定方法的测定结果是否接近血糖真值，主要依靠方法的什么性能?试举例加以说明。

答：所谓真血糖是指血液中的葡萄糖。

测定方法的特性越高其血糖测定结果越接近真值。例如同位素稀释—质谱法所测得的血糖值没有偏差，是公认的决定性血糖测定方法;已糖激酶(HK)法试剂两个工具酶对底物高度专一，故其测定结果准确性很高，是公认的血糖测定的参考性方法;而葡萄糖氧化酶(GOD)法中GOD对葡萄糖的专一性是很高的，但其第二步反应的过氧化物酶(POD)特异性差，维生素C、胆红素、尿酸等多种物质能使H2O2还原，使测定结果偏低。所以GOD法只能用于常规分析。

4何谓Trinder反应?试说明此反应的分析特性。

答：Trinder反应是指对氧化酶催化底物氧化过程中产生的H2O2在过氧化物酶作用下，与4—氨基安替匹林及苯酚生成红色色素的反应。此反应首先由Trinder于1969年提出，故名。Trinder反应最初使用苯酚作生色剂，后来有许多作者提出十余种化合物替代苯酚(如2.4—二氯酚等)，使反应的灵敏度得以显著提高。Trinder反应构成了葡萄糖、胆固醇、甘油三脂及尿酸等酶法测定的基础，有较为重要的使用价值。但是由于催化Trinder反应的过氧化物酶对底物专一性差，维生素C、尿酸、谷胱甘肽及胆红素等还原性物质也与色原性物质竞争H2O2，从而使氧化过程中产生的H2O2被消耗，导致色素形成减少，测定结果偏低。此外，工具酶中如夹杂有较多的过氧化氢酶，也能消耗氧化产物H2O2，使被测物的测定值偏低。

5评述K、Na、Li元素原子火焰发射光谱的发生原理。

答：火焰光度分析法是一种发射光谱分析方法。样品中的K、Na、Li原子受火焰的热能作用而被激发处于高能级的激发态。处于激发态的原子不稳定，要跃迁回到低能级的基态。当此电子跃迁回到基态时就放出能量，发射出元素特有波长的辐射谱线，利用此原理可进行火焰光度分析。Na原子的3s基态电子经火焰激发可跃迁到3p、3d或4p亚层中。当此电子由3p返回到3s亚层时。则产生589nm波长的辐射(黄色火焰)。K原子受火焰激发时，4s电子可跃迁到4p、4d或5p亚层，若由4p返回4s基态时，可辐射出767nm波长的深红色光谱。Li原子的2s电子受火焰激发可跃迁到2p、3p或3d亚层，若由2p返回2s基态时，发射出光谱波长为671nm(红色火焰)。