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2018年《临床检验初级技师》资格考试考点梳理(16)

中华考试网  【 】  [ 2017年9月12日 ]

1说明双缩脲法成为测定血清总蛋白参考方法的理由?并解释其标化法计算公式中的0.298是什么含义?

答:(1)我国卫生部医政司推荐的双缩脲法试剂配方是Doumas1981年推荐的优化配方,此配方的精密度和准确度优于其它生化专著中介绍的不同配方;本方法简便、准确、重复性好,试剂与蛋白质肽键反应专一,不受蛋白质分子量和氨基酸组成的影响,干扰因素较少,故成为公认的测定血清总蛋白的参考方法。

(2)Doumas等确定0.298为纯蛋白—双缩脲复合物的吸光系数。即按照Doumas的标准试剂配方,在波长540nm,比色杯光径1.0cm,分光光度计波长带宽≤2nm等标化条件下,双缩脲反应液中蛋白质浓度为1.0g/L时的吸光度。

2血清白蛋白溴甲酚绿(BCG)法为什么在反应5S时读取A值,而溴甲酚紫(BCP)法为什么定在60S以后?

答:因为血清白蛋白与BCG呈现即刻反应后反应液颜色即不再加深,但是所测定的血清样品中,除白蛋白外尚有相当数量的a1-抗胰蛋白酶、a1-酸性糖蛋白、转铁蛋白、触珠蛋白、c反应蛋白和铜蓝蛋白等所谓“慢反应蛋白质”,它们与BCG的反应要在15min甚至1h才能完成。为了防止这种非特异性反应的干扰,故将BCG法的读取A值时间定在5s(或10s),这样所测得的结果与免疫火箭电泳法高度一致。

BCP试剂只与白蛋白反应,不与白蛋白以外的其它蛋白质显色。故此法测定A值的时间可放在呈色后1h以内,不影响测定值的准确性。

3何谓真血糖?判断一项血糖测定方法的测定结果是否接近血糖真值,主要依靠方法的什么性能?试举例加以说明。

答:所谓真血糖是指血液中的葡萄糖。

测定方法的特性越高其血糖测定结果越接近真值。例如同位素稀释—质谱法所测得的血糖值没有偏差,是公认的决定性血糖测定方法;已糖激酶(HK)法试剂两个工具酶对底物高度专一,故其测定结果准确性很高,是公认的血糖测定的参考性方法;而葡萄糖氧化酶(GOD)法中GOD对葡萄糖的专一性是很高的,但其第二步反应的过氧化物酶(POD)特异性差,维生素C、胆红素、尿酸等多种物质能使H2O2还原,使测定结果偏低。所以GOD法只能用于常规分析。

4何谓Trinder反应?试说明此反应的分析特性。

答:Trinder反应是指对氧化酶催化底物氧化过程中产生的H2O2在过氧化物酶作用下,与4—氨基安替匹林及苯酚生成红色色素的反应。此反应首先由Trinder于1969年提出,故名。Trinder反应最初使用苯酚作生色剂,后来有许多作者提出十余种化合物替代苯酚(如2.4—二氯酚等),使反应的灵敏度得以显著提高。Trinder反应构成了葡萄糖、胆固醇、甘油三脂及尿酸等酶法测定的基础,有较为重要的使用价值。但是由于催化Trinder反应的过氧化物酶对底物专一性差,维生素C、尿酸、谷胱甘肽及胆红素等还原性物质也与色原性物质竞争H2O2,从而使氧化过程中产生的H2O2被消耗,导致色素形成减少,测定结果偏低。此外,工具酶中如夹杂有较多的过氧化氢酶,也能消耗氧化产物H2O2,使被测物的测定值偏低。

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