四、简答题
1.简述常用于标记核酸分子的活化生物素有哪几种。
DA①光生物素:是一种化学合成的衍生物,用于DNA或RNA的标记。生物素通过噻吩环戊
酸侧链上的羧基与多种大分子偶联活化后,可用于标记各种蛋白质形成生物素化蛋白质衍生
物。而且一个蛋白质分子可联结多个生物素分子,从而使其具有较高的比活性,在和亲和素
反应中成为多价。生物素化大分子的多价性,是BAS 多级放大作用的物质基础。生物素化
蛋白质衍生物有二类,一种是生物素化的大分子生物活性物质(如抗原、抗体),另一种是
标记材料(如酶)结合生物素后制成的标记物。
②生物素脱氧核苷三磷酸:先将生物素与某种脱氧核苷酸连接成活化生物素,再采用缺口移
位法而掺入到双链DNA中。
③BNHS和BHZ:二者均可在一定条件下与核酸胞嘧啶分子中的N4氨基交联,使核酸分子
生物素化。
2.简述生物素化蛋白质衍生物的特性。
DA:BAS 在反应中的基本类型有二种:一类以游离亲和素为中间物,分别连接包含生物素化大分
子的待检反应体系和标记生物素,称为BAB 法;后来又在此基础上发展了亲和素-生物素化酶
复合物技术(ABC)。另一类是直接用标记亲和素连接生物素化大分子反应体系进行检测的
BA法,或称标记亲和素-生物素法(LAB)。
3.简述BAS的特点。
DA.①灵敏度高,②其反应呈高度专一性,③稳定性高,④适用范围广,⑤实验成本低。
4.简述几种常用于标记不同类型生物大分子的活化生物素。
DA①标记蛋白质氨基的活化生物素,如BNHS,BCNHS。
②标记蛋白质醛基的活化生物素,如BHZ,BCHZ。
③标记蛋白质巯基的活化生物素,如MPB。
④标记核酸的活化生物素,如光生物素。
5.简述BAS在应用中的二种基本类型。
DA:BAS在反应中的基本类型有二种:一类以游离亲和素为中间物,分别连接包含生物素化大分子的待检反应体系和标记生物素,称为BAB法;后来又在此基础上发展了亲和素-生物素化酶复合物技术(ABC)。另一类是直接用标记亲和素连接生物素化大分子反应体系进行检测的BA法,或称标记亲和素-生物素法(LAB)。