2020临床医学检验技士《免疫检验》第二十二章：感染性疾病与感染免疫检测

　　第二十二章　感染性疾病与感染免疫检测

　　感染是病原体以某种传播形式从传染源传播到易感者，并在宿主体内生长繁殖、释放毒素或导致机体内微生态平衡失调的病理生理过程。

　　感染性疾病的早期诊断临床上最为常用的是病原体抗原检测和宿主血清抗体检测。IgM类抗体出现早，消失快，常作为感染的早期诊断指标。IgG类抗体出现晚，维持时间长，是流行病学调查的重要根据。

　　第一节　细菌感染性疾病的免疫检测

　　细胞免疫是抗细胞内细菌感染的主要效应机制。体液免疫在抗细胞外细菌感染中发挥主要作用。

　　一、链球菌感染

　　(一)链球菌

　　链球菌感染最常用的免疫学实验室检查是抗链球菌溶血素“O”(ASO)检测。临床上常采用胶乳凝集试验、免疫散射比浊法检测ASO。免疫功能不全或大量使用肾上腺皮质激素时，ASO水平可不升高。

　　(二)猪链球菌

　　分子诊断技术是鉴定分型诊断方法，常用于猪链球菌的快速诊断以及流行病学调查。免疫学技术主要应用患者血清学鉴定。

　　二、伤寒沙门菌感染

　　伤寒沙门菌感染的实验室诊断主要依赖于免疫学检测方法。

　　1.肥达反应

　　为血清凝集试验。产生凝集时抗体效价≥1：80为阳性，或双份血清效价呈4倍以上增长。

　　2.ELISA

　　(1)以伤寒沙门菌脂多糖(内毒素的主要成分)为抗原，用间接ELISA法检测伤寒患者血清中特异性IgM抗体，有助于伤寒的早期诊断。

　　(2)以高纯度的伤寒沙门菌Vi抗原包被反应板，采用ELISA法测定患者血清中的Vi抗体，有助于检出伤寒带菌者及慢性带菌者。

　　三、结核分枝杆菌感染

　　细胞免疫与体液免疫在结核感染时可发生分离现象，即活动型细胞免疫功能低下，抗体效价升高。在恢复期或稳定期，细胞免疫功能增强，抗体效价下降。

　　抗结核杆菌抗体无保护作用，但高滴度的抗PPD抗体可作为结核病辅助诊断的手段。细胞免疫在抗感染免疫中起重要作用，即致敏细胞与抗原相遇，释放淋巴因子(主要是IFN-γ)，作用于巨噬细胞，使吞噬能力增加。

　　结核分枝杆菌感染的免疫学方法有：

　　1.结核菌素试验：抗PPD抗体阳性是结核活动的一个重要标志。

　　2.分枝杆菌抗体检测：以分枝杆菌外膜抗原为已知抗原，检测待测血清中的分枝杆菌抗体。可采用胶体金方法进行。其他分枝杆菌感染、麻风病也可呈阳性。

　　3.全血干扰素测定法：当全血与PPD和对照抗原(植物血凝素)共同孵育后，致敏的淋巴细胞可分泌IFN-γ，通过检测IFN-γ的含量来鉴定菌种。

　　本试验所得结果与结核菌素试验相当，且受BCG接种史影响小、又能与非结核分枝杆菌进行区分，同时还可避免结核菌素试验在操作上与结果判断上存在的多种主观或人为因素的影响。

　　第二节　真菌感染性疾病的免疫检验

　　一、深部真菌感染

　　真菌感染的免疫学检测

　　1.循环抗原检测：念珠菌病血清学诊断的主要手段。

　　(1)胶乳凝集试验(LA)检测念珠菌表面抗原甘露聚糖。ELISA和免疫印迹检测含念珠菌胞浆抗原烯醇化酶。系统性念珠菌感染的初期血中抗原浓度多在5μl以下且可能在短期内消失。血清中以抗念珠菌抗体为主要成分的蛋白会影响抗原的检出，56℃加热30分钟或血清中加入Na2EDTA后121℃加热5分钟后碱处理并离心等措施减少或去除影响。

　　(2)新型隐球菌循环荚膜抗原测定用于诊断新型隐球菌病。ELISA法更为灵敏。在检测脑脊液标本时，可能会因为抗原含量过高而出现假阳性，此时应做倍比稀释。类风湿因子(RF)与隐球菌可能存在交叉反应。采用EDTA或蛋白酶处理或煮沸5分钟可以去除RF。

　　(3)半乳糖抗原和其他糖蛋白抗原的测定可用于曲霉感染测定。

　　2.循环抗体检测：组织胞浆菌病、球孢子菌病检测特异性抗体意义较大，孢子丝菌病在培养阴性而又高度怀疑时也可应用。抗体水平4倍以上增高被认为具有临床意义，间隔2～3周的连续动态观察更有意义。

　　二、类真菌感染

　　卡氏肺孢菌，又称卡氏肺孢子虫，常见于：①早产婴儿和新生儿;②血液系统恶性肿瘤，如白血病、淋巴瘤;③使用免疫抑制剂的器官移植受者;④艾滋病患者;⑤其他原因引起的免疫功能极度低下者。

　　目前病原诊断主要依靠形态学检查。

　　ELISA和胶乳微粒凝集试验被用于检测抗原抗体和相应抗原。

　　第三节　病毒感染性疾病的免疫检测

　　细胞免疫在抗病毒感染中发挥着主要的作用，特别是细胞毒T淋巴细胞(CTL)和相关的细胞因子。

　　特异性抗病毒抗体发挥免疫清除的作用，可通过：①中和作用是机体灭活游离病毒的主要方式。②促进吞噬。③激活补体。④通过ADCC作用或通过激活补体，使靶细胞溶解。

　　一、流感病毒感染

　　(一)流感病毒

　　1.病毒的抗原检测：常采用免疫荧光或酶标记技术，以标记抗体检测鼻咽分泌物中的流感病毒抗原，有助于早期诊断。阳性结果具有诊断意义，但阴性不能完全排除。

　　2.病毒的抗体检测

　　①血凝抑制试验或补体结合试验可以检测急性期和恢复期患者血清总抗体效价，效价4倍升高有助于回顾性诊断和流行病学调查，但不能用于早期诊断。

　　②时间分辨免疫荧光技术：阳性率可达60%～80%。

　　(二)禽流感病毒

　　AIV感染的免疫学诊断主要包括对AIV特异性IgM和IgG抗体的检测。检测方法包括：禽流感血凝抑制试验、神经氨酸抑制试验、琼脂免疫扩散试验、ELISA法及抗体斑点-ELISA(Dot-ELISA)法等。

　　二、轮状病毒感染

　　1.抗原检测 用ELISA或者免疫酶斑点试验从粪便标本中检测RV抗原，如果结果阳性则可诊断为RV感染。如用单克隆抗RV抗体检测，灵敏度可大大提高。

　　2.抗体检测 可采用ELISA法检测。感染5天后患者血清中即可测出IgM抗体水平的升高，可用于早期诊断。IgG抗体的检测常采用发病早期和恢复期双份血清进行，如有4倍以上的增长则有诊断意义。

　　三、肝炎病毒感染

　　(一)甲型肝炎病毒感染

　　常采用ELISA和化学发光技术。HAV IgM是感染的特异性标志，有助于区分现症感染和既往感染。HAV-IgM在急性感染时出现较早(发病后1～4周)，上升快，高峰效价高，持续时间短(常于3～6个月后转阴性)，是急性HAV感染或者复发的可靠指标。HAV-IgG一般于感染后4周出现，24周达高峰，可维持多年，甚至终生。

　　(二)乙型肝炎病毒感染

　　大三阳：HBsAg、HBeAg和抗-HBc。

　　小三阳：HBsAg、抗-HBe和抗-HBc。

　　1.乙型肝炎表面抗原 血清HBsAg的检测可采用固相放射免疫法、ELISA、反向间接血凝试验等方法，是乙型肝炎患者早期诊断的重要指标。目前可以采用化学发光法对血清中的HBsAg进行定量检测，这对肝炎患者动态疗效观察很有价值。

　　(1)HBsAg为乙肝患者血清中首先出现的病毒标志物，可作为乙肝的早期诊断和普查。在急性肝炎潜伏期即可出现阳性。

　　(2)HBsAg阴性不能完全排除乙型肝炎。

　　(3)同时出现HBsAg和抗-HBs，可能是不同亚型重复感染，即原先存在的抗-HBs不能对另一型HBsAg起中和作用。

　　(4)只要在血中和其他体液中有Dane颗粒，且有密切接触就有传染的可能。如果仅表现为HBsAg阳性者，传染性较弱。

　　2.乙型肝炎病毒表面抗体

　　抗-HBs是一种保护性抗体，是机体感染或接种乙肝疫苗的标志。目前常用的检测方法是固相放射免疫法和ELISA法。

　　(1)抗-HBs阳性提示急性感染后的康复。

　　(2)在接受抗-HBs阳性血液的受血者中，可出现短暂性的抗-HBs阳性。

　　(3)在接受HBV疫苗接种后，血中可出现抗-HBs阳性。

　　(4)抗-HBs与HBsAg同时阳性可见于急性重型肝炎或慢性活动性肝炎患者，此类患者为免疫功能低下或不同亚型感染，如同时抗-HBc阳性则应注意预后及发展。

　　(5)HBsAg含量消失同时伴抗-HBs的出现，是目前临床上慢性乙型肝炎治疗的最终目标。

　　3.乙型肝炎病毒e抗原

　　(1)HBeAg阳性是乙肝传染性的标志，在急性乙型肝炎早期常有HBeAg的检出。

　　(2)乙型肝炎感染早期，HBeAg与HBsAg同时阳性可能性较大;HBeAg阳性尚和HBV DNA复制、肝脏损害程度相关。

　　4.乙型肝炎病毒e抗体 抗-HBe多出现于急性肝炎恢复期的患者中，比抗-HBs转阳要早，常在HBsAg即将消失或已经消失时检出，存在于乙肝恢复期及痊愈的患者血清中，也可出现于慢性肝炎、肝硬化或无症状的HBsAg携带者，并可长期存在。

　　乙型肝炎病毒e抗原的血清学转换，即HBeAg含量消失同时伴抗-HBe的出现，是目前临床上慢性乙型肝炎治疗的近期目标。

　　5.乙型肝炎病毒核心抗原

　　(1)HBcAg是乙型肝炎病毒存在的直接标志，HBcAg与HBV复制呈正相关，可反映HBV的活动性及复制程度。

　　(2)有助于乙肝病情、疗效和预后的判断。

　　6.乙型肝炎病毒核心抗体-IgM

　　(1)急性乙肝的诊断：抗-HBc-IgM是早期HBV感染的特异性血清学标志。初次感染早期即上升，且稳定表达。

　　(2)预后判断：抗-HBc-IgM效价降低常提示预后较好，迟迟不降至正常范围者，提示有转化为慢性肝炎的可能。

　　(3)有助于区分慢性活动性或非活动性肝炎：慢性活动性肝炎时，抗-HBc-IgM常呈阳性，但一般效价较低。在HBV活动性复制时，可明显升高，以此可作为急性病毒复制和机体免疫应答的标志。

　　(4)急性重型乙型肝炎诊断：但抗HBc-IgM对HBsAg阴性的急性重型肝炎有早期诊断价值。

　　7.乙型肝炎病毒核心抗体-IgG

　　HBcAb-IgG出现较早，不是保护性抗体，检测HBcAb-IgG有流行病学调查意义。

　　8.乙型肝炎病毒前S1抗原

　　(1)pre-S1仅在HBV-DNA阳性血清中检出，并随HBeAg消失而消失，其可作为病毒清除与病毒转阴的指标。

　　(2)pre-S1阳性可反映病毒的复制和传染性。且pre-S1阳性常提示急性乙型肝炎向慢性转变。阴转愈早，疗程愈短，预后也愈好。

　　9.乙型肝炎病毒前S2抗原

　　(1)在急性乙型肝炎时，pre-S2蛋白的出现同HBeAg一样可作为HBV复制标志之一。在慢性肝炎中，pre-S2蛋白的出现提示慢性肝炎有活动。pre-S2的逐步下降，提示HBeAg即将消失以及抗-HBe的产生。

　　(2)pre-S2的长期存在，提示患者易转慢性化，pre-S2蛋白的检出与HBV-DNA活动呈正相关。但与疾病的严重程度无关。

　　(三)丙型肝炎病毒感染

　　特异性抗体HCV-IgG和HCV-IgM的免疫学检测是临床常用的诊断方法。

　　抗HCV抗体不是中和抗体，没有保护性，但它却是HCV感染的标志性物质。

　　HCV-IgM阳性可作为HCV活动性复制的血清学标志，且常与慢性丙肝患者的急性发作有关。

　　(四)丁型肝炎病毒感染

　　1.抗HDV-IgM的检测 常用捕获法ELISA。在HDV急性感染时，抗HDV-IgM是首先可以检出的抗体，尤其是在同步感染时，抗 HDV-IgM 往往是唯一可检出的HDV感染的血清学标志物。

　　2.抗HDV-IgG的检测 常采用竞争抑制法。抗HDV-IgG出现在抗HDV-IgM下降之际。在慢性HDV感染中，其IgG抗体保持高滴度，即使HDV感染终止后仍可存在数年。

　　(五)戊型肝炎病毒感染

　　HEV-IgM出现和消失均较早，持续时间短，是HEV急性感染的诊断指标。

　　HEV-IgG被发现常与HEV-IgM同时出现，且具有较高的检出率和抗体效价。因此HEV-IgG也可作为HEV急性感染的一项辅助指标。然而，由于HEV抗原性较弱，HEV-IgG的阳性率较低，血清中抗体存在时间短。

　　四、冠状病毒感染

　　1.免疫荧光技术 用于检测血清中的IgM抗体，约在疾病开始后的10天出现阳性结果。该方法也可用于IgG抗体的测定。

　　2.ELISA技术 可用于SARS患者血清中IgM和IgG抗体混合物的测定。感染早期，上述抗体有可能无法测出，检测阳性提示既往的病毒感染。急性期到恢复期的阳转或者是抗体效价的4倍增长，提示有近期感染。

　　第四节　先天性感染的免疫检测

　　一、弓形虫感染

　　1.循环抗原(CAg)检测：双抗体夹心ELISA法检测

　　2.特异性抗体检测

　　①以全虫抗原检测血清中抗虫体表膜的抗体，采用染色试验、直接凝集试验和间接荧光抗体技术。初次感染弓形虫后，此抗体很快出现，持续6个月，再次感染时可再次升高。②用虫体裂解后的提取物质为抗原，检测针对细胞质成分的抗体，使用间接血凝试验、ELISA、补体结合试验及其改良方法。③以滋养体为抗原，采用间接免疫荧光试验检测特异性抗体，包括弓形虫IgG和IgM。单份血清IgG抗体效价>1:512，提示近期感染的可能性大。

　　二、风疹病毒感染

　　1.RUV总抗体效价 常采用血凝抑制试验、中和试验或补体结合法来进行。取病初及恢复期双份血清进行比较，抗体效价4倍以上增高有诊断意义。

　　2.RUV IgG检测 几乎可与RUV IgM同时出现，并持续升高，持续时间可长。RUV IgG的测定尚可帮助了解人群风疹隐性感染水平及观察疫苗接种的效果。

　　3.RUV IgM检测 常采用ELISA方法。婴儿出生时如有特异高效价IgM抗体，可确诊为先天性风疹。RUV IgM阳性常提示有近期感染，对早期诊断RUV感染以及决定患风疹孕妇是否需要终止妊娠有临床指导意义。

　　三、巨细胞病毒感染

　　1.HCMV抗原检测

　　①早期抗原免疫荧光检查(DEAFF)：通过测定DNA合成前产生的早期抗原(EA)来确定HCMV的存在。②HCMV抗原血症诊断：可帮助早期诊断免疫抑制或免疫缺陷患者的活动性HCMV感染。该方法直接定性或定量检测外周血白细胞中HCMV抗原的表达，一般在活动性感染前1周即出现阳性。

　　2.HCMV抗体检测

　　通过检测血清中特异性IgG和IgM抗体，诊断HCMV的感染。HCMV IgM阳性提示有活动性感染。常用的检测方法包括：补体结合试验、间接血凝试验、免疫荧光试验、免疫印迹试验、ELISA及放射性免疫试验等。

　　四、单纯疱疹病毒感染

　　1.HSV抗原检测 采用HSV特异性单克隆抗体，以免疫荧光或ELISA方法直接检测患者组织或分泌物中的HSV抗原。

　　2.HSV抗体检测 是临床上用来检测HSV感染的一种最常见手段。主要采用间接免疫荧光法和ELISA法检测特异性HSV IgM和IgG抗体。

　　第五节　寄生虫感染的免疫检测

　　一、疟原虫感染

　　1.抗原检测：常采用放射免疫试验和固相放射免疫抑制试验检测受感染红细胞内的疟原虫抗原，主要用于恶性疟疾的诊断。

　　2.抗体检测

　　①间接荧光抗体试验：是目前国内外应用最为广泛的一种检测方法。一般认为受检测血清阳性在1:20以上才有意义。

　　②间接红细胞凝集试验：这种方法测定的抗体只有属特异性，因此一般多采用诺氏疟原虫作为抗原。血清效价大于1:16时具诊断意义。

　　③ELISA法：抗原多为恶性疟原虫或食蟹疟原虫的粗提物。

　　④斑点免疫结合试验：包被抗原为恶性疟原虫可溶性抗原。

　　二、血吸虫感染

　　1.环卵沉淀反应(COPT)：一种抗原-抗体反应。当虫卵内成熟毛蚴分泌物与人血清内相应抗体结合后，在虫卵周围会形成泡状、指状或条状具有明显折光性的特异性沉淀物，即为阳性。

　　2.间接红细胞凝集试验(IHA)以甲醛和鞣酸处理过的绵羊红细胞或“O”型人红细胞为载体，将血吸虫虫卵或成虫抗原吸附于载体上，当受检者血清中存在相应抗体时，红细胞会因抗原-抗体的结合而呈现凝集现象。

　　3.乳胶凝集试验(LA)：乳胶凝集试验以聚苯乙烯乳胶颗粒为载体，将血吸虫抗原连接在乳胶颗粒上，若待测血清中有相应抗体，则将产生抗原抗体结合，乳胶颗粒发生凝集。

　　4.ELISA

　　5.酶联免疫印迹技术

　　三、丝虫感染

　　ELISA法检测丝虫抗体。以微丝蚴作为固定抗原，检测待测血清中的特异性抗体。

　　四、华支睾吸虫感染

　　Dot-ELISA法检测的特异性抗体。

　　五、猪囊尾蚴感染

　　1.抗体检测 ①IgG抗体：囊虫病患者血清中多种抗体均升高，其中以IgG增高最为显著。人感染囊尾蚴后10天即可检测到抗体。然而，IgG在治疗后一定时间内变化不显著，不能及时反映疾病的动态发展。②IgG4抗体：IgG4抗体在脑囊虫病患者起主导作用，且与治疗反应有一定的相关性。③IgE抗体：囊虫病患者可有IgE升高，IgE在脑囊虫病的病因学中起一定作用，皮内试验即为检测IgE的方法。

　　2.循环抗原检测：循环抗原是虫体分泌物或其代谢产物，其半衰期短，循环抗原阳性表明体内有活囊尾蚴存在。

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