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2020临床医学检验技士《免疫检验》第四章考点:单克隆抗体的制备

中华考试网    2019-07-10   【

第二节 单克隆抗体的制备

  一、单克隆抗体的产生

  (一)动物体内诱生法 目前McAb治疗用或体外诊断用 的多采用该法。小鼠腹腔接种液体石蜡,一周后接种 杂交瘤细胞悬液,接种10~14天后,无菌抽取腹水,离心取上清液即可。

  (二)体外培养法 这是实验室制备的方法。 将杂交瘤细胞置培养瓶中培养,离心后收集上清液。

  二、单克隆抗体的纯化

  从培养液或腹腔积液获得的单克隆抗体,不需要纯化 即可应用于日常诊断或定性研究

  如果用于免疫标记测定 ,须分离和纯化 。可用半饱和、饱和硫酸铵进行沉淀,进行初步浓缩和纯化。可用亲和层析法进一步纯化。

  三、单克隆化抗体的性质鉴定

  (一)Ig类型测定

  (二)特异性测定

  (三)抗体效价测定 如ELISA效价低于10万 ,用于诊断测定将不会达到很高的敏感性,应重新制备。

  (四)表位测定

  (五)亲和力测定

  (六)染色体分析

  四、单克隆化抗体的特性

  (一)单克隆抗体的特性

  1.高度特异性

  2.高度的均一性和可重复性

  3.弱凝集反应和不呈现沉淀反应

  4.对环境敏感性 单克隆抗体越纯 ,对温度越敏感,对pH越敏感。低浓度的NaCl 对单克隆抗体有一定的保护作用。

  (二)单克隆抗体的优点与局限性

  1.单克隆抗体的优点

  (1)杂交瘤可以在体外“永久”地存活并传代,只要不发生细胞株的基因突变,就可以不断地生产高特异性、高均一性的抗体

  (2)可以用相对不纯的抗原,获得大量高度特异的 、均一的抗体。

  (3)由于可能得到“无限量”的均一性抗体,所以适用于以标记抗体为特点的免疫学分析方法 ,如IRMA和ELISA等。

  (4)由于单克隆抗体的高特异性和单一生物学功能,可用于体内的放射免疫显像和免疫导向治疗

  2.单克隆抗体的局限性

  (1)单克隆抗体不能进行沉淀和凝集反应

  (2)单克隆抗体的反应强度不如多克隆抗体

  (3)制备技术复杂 ,而且费时费工 ,所以单克隆抗体的价格也昂贵

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