2019年<临床检验初级检验技师>第四章第一节杂交瘤技术的基本原理

第一节杂交瘤技术的基本原理

杂交瘤技术的原理是使免疫的小鼠脾细胞与具有体外长期繁殖能力的小鼠骨髓瘤细胞融为一体，成为杂交瘤细胞，最终获得既能产生所需单克隆抗体，又能长期繁殖的杂交瘤细胞系。

将这种杂交瘤细胞扩大培养,接种于小鼠腹腔,在小鼠腹腔积液中即可得到高效价的单克隆抗体。

一、杂交瘤技术

包括两种亲本细胞的选择与制备，细胞融合，杂交瘤细胞的筛选与克隆化

(一)小鼠骨髓瘤细胞

细胞株稳定，易于传代培养

细胞株自身不会产生免疫球蛋白或细胞因子

该细胞是次黄嘌呤磷酸核酸核糖转化酶(HGPRT)的缺陷株

(二)免疫脾细胞

免疫用抗原尽量提高其纯度和活性，免疫途径多用腹腔内或皮内多点注射法

如为珍贵微量抗原，可用脾脏内直接注射法进行免疫

(三)细胞融合

PEG(聚乙二醇)可能导致细胞膜上脂类物质的物理结构重排，使细胞膜容易打开而有助于细胞融合。

(四)杂交瘤细胞的选择性培养

HAT培养液，是在基础细胞培养液内添加次黄嘌呤、甲氨蝶呤和胸腺嘧啶核苷

1.脾细胞(指B细胞)在一般培养基中不能生长繁殖

2.骨髓瘤细胞

因缺乏HGPRT而合成DNA，骨髓瘤细胞在HAT培养基中不能增殖而死亡

3.杂交瘤细胞

由骨髓瘤细胞和脾细胞融合形成的杂交瘤细胞

由于与脾细胞融合，可获得其HGPRT，可以合成DNA。因此，杂交瘤细胞在选择性培养得以生存而被筛选出来

二、阳性杂交瘤细胞的克隆化培养

单个细胞培养又称克隆化

细胞克隆化有以下几种方法：

1.有限稀释法

2.显微操作法

3.荧光激活细胞分选仪

4.软琼脂平板法

三、阳性杂交瘤细胞的冻存

目前均采用液氮保存细胞