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多项选择题关于PCR引物设计的原理，下列叙述正确的是
A.待扩增片段的序列是已知的，在片段两侧确定引物顺序
B.引物长度一般为15～30个核苷酸，但也可多至50个左右
C.引物中的碱基应随机分布，G＋C的含量宜在45%～55%
D.引物内部不应形成二级结构，避免在链内存在互补的序列
E.可以在引物的3′末端引入特定的酶切位点
参考答案：ABCD
答案解析：引物的延伸从3＇端开始，因此3＇端的几个碱基与模板DNA均需严格配对，不能进行任何修饰，否则不能进行有效的延伸，甚至导致PCR扩增完全失败。
涉及考点
微生物检验技术（副高）考试大纲
综合练习
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