2018临床检验技师免疫检验模拟试题（五）_第6页

四、问答题

1.决定抗原抗体最佳配比的方法有几种?

答(1)抗原稀释法：将可溶性抗原作一系列倍比稀释，然后向各管中加入一定浓度

的适量抗血清，37℃反应后，产生的沉淀量随抗原量变化而不同，以沉淀物最多的管为最

适比例管。(2)抗体稀释法：是将恒定量抗原与不同倍比稀释的抗体反应，出现沉淀物最多的管为抗体最适比例管。(3)棋盘格法：亦称方阵法。抗原抗体同时稀释，可一次完成抗原和抗体的滴定，并找出抗原、抗体的最适比。是前二法的结合。

2.简述单向免疫扩散试验的基本原理和技术要点。

答(1)原理：待测抗原从局部含有定量抗体的凝胶内自由向周围扩散，抗原抗体特

异性结合，在两者比例合适的部位，形成白色沉淀环，沉淀环的大小与抗原的浓度呈正

相关。(2)技术要点：将抗体和热融化琼脂(约50%)混合，倾注成平板。待凝固后在琼

脂板上打孔，孔中加入已稀释的抗原液，和不同浓度的抗原标准品，置37~12温箱，24～

48h后观察孔周围沉淀环。量取沉淀环直径，通过抗原标准品，计算待测抗原的浓度。

3.在双向免疫扩散试验中，如何判定结果?

答：双向免疫扩散中，出现沉淀线，表明存在相应的抗原、抗体，不出现沉淀线则表

明缺乏抗原或抗体。沉淀线的形成是根据抗原抗体两者比例所致，沉淀线靠近抗原孔，提

示抗体含量高;靠近抗体孔，提示抗原含量较多。

4.在双向免疫扩散试验中，如何分析抗原或抗体相对分子量大小?

答：抗原或抗体在琼脂内扩散的速度受分子量影响。分子量大，则抗原抗体扩散慢、

扩散圈小、局部浓度较大，因此形成的沉淀线弯向分子量大的一方。如二者分子量相等，

则形成直线。抗体多为IgG，分子量约150 000，据此可粗略估计未知抗原的分子量。

5.免疫电泳技术的优点是什么?免疫电泳有哪些用途?

答(1)优点：免疫电泳技术是将免疫扩散和电泳相结合的一种免疫学分析技术，既

有抗原抗体反应的高度特异性，又有电泳分离技术的快速、灵敏和高分辨力，广泛应用于

牛物医学领域。(2)用途：①纯化抗原或抗体的成分分析，分析其纯度;②正常及异常体液中蛋白质成分的分析，如无丙种球蛋白血症、冷球蛋白血症、多发性骨髓瘤、白血病、系统性红斑狼疮、肝病等病人的血清蛋白成分的分析，多发性骨髓瘤血清M蛋白的检测和鉴定;

③免疫后不同抗体组分的动态变化研究。

6.对流免疫电泳时，抗体为什么流向负极?

答：大部分蛋白质抗原在碱性溶液中带负电荷，电泳时从负极向正极泳动，而抗体

IgG分子量大，暴露的极性基团较少，在缓冲液中解离的也少，向正极的泳动速度较慢，

电泳时由电渗引向负极的液流速度超过了IgG向正极的泳动，带动抗体流向负极，使抗原

和抗体定向对流并发生反应，出现肉眼可见的沉淀线。

7.简述火箭免疫电泳的原理和主要用途。

答(1)原理：火箭免疫电泳是将单向免疫扩散和电泳相结合的技术。抗原在电场作

用下，在含有适量抗体的琼脂糖凝胶中向正极泳动，逐渐形成梯度浓度，在抗原抗体比例

适当时形成沉淀，随着抗原量的减少，沉淀带越来越窄，形成火箭峰样沉淀，峰形高低与

抗原量呈正相关。用已知量标准抗原作对照，绘制标准曲线，根据检测样品沉淀峰的高度

可算出待测抗原的含量。(2)主要用途：①抗原蛋白定量，如IgA、IgG、IgM和sIgA检测;②C3、C4及其裂解产物检测;③AFP等检测。

8.免疫浊度测定的基本原理是什么?有哪些类型?

答(1)基本原理：免疫浊度测定是将液相内的沉淀试验与现代光学仪器和自动分析

技术相结合的一项分析技术。当可溶性抗原与相应的抗体特异结合，在二者比例合适、并

有一定浓度的电解质存在时，可以形成不溶性的免疫复合物，使反应液出现浊度。这种浊

度可用肉眼或仪器测知，并可通过浊度推算出复合物的量，即抗原或抗体的量。(2)类型：按测量方式可分为透射免疫比浊法和散射免疫比浊法。按测定速度可分为速率比浊法和终点比浊法。

9.散射免疫比浊法的基本原理是什么?

答：沿水平轴照射的一定波长的光，在通过溶液时，光线可被其中的免疫复合物粒子

颗粒折射，发生偏转，产生散射光。根据Rayle培h散射方程，散射光强度与粒子(免疫复

合物)的浓度和体积成正比，通过测量散射光的强度，可计算出待测抗原的浓度。

10.速率散射比浊法中的“速率”是指什么?

答：所谓速率是指单位时间内抗原与抗体反应的速度。抗原与抗体结合形成免疫复合

物的速度，在每个单位时间内是不相同的，在抗体过量的情况下，随着反应时问的延长，

免疫复合物的总量逐渐增加，通常在25s时出现一个反应最快的速率峰。峰值与抗原量呈

正相关。

11.速率散射比浊法中，测定的是单位时间内什么时间段的散射信号值?

答：速率散射比浊法是测定单位时间内免疫复合物形成的最快时间段(而不是测定

免疫复合物的最大量及最稳定期)的散射信号值，此时因抗体量大于抗原量，形成的免

疫复合物为小分子不溶性颗粒，产生的散射信号最强，形成的速率散射信号值最大。

12.免疫浊度测定的反应体系中，为什么必须始终保持抗体过量?

答：抗原和抗体的比例是浊度形成的关键因素，抗原和抗体必须在一个适当的浓度才

会出现最高结合率。当抗原过量时，由于钩状效应，形成的免疫复合物分子小，而且会发

生再解离，使浊度下降，光散射减少。当反应液中抗体过量时，免疫复合物的形成随着抗

原量的增加而递增，光散射的强度也随之递增，因此，免疫浊度测定的反应体系中必须始

终保持抗体过量，以保证免疫复合物的生成量与浊度的改变一致，这是免疫浊度测定的基

本原则。

13.全自动免疫浊度测定仪均具有抗原过量的自动监测功能，其设计的基本原理是什么?

答：在抗体过量的前提下，待测抗原在反应液中与抗体快速反应形成稳定的小复合物

颗粒，产生散射光信号，该信号随复合物的增加和时间的延长(在抗体过量阶段)而动

态性增强，形成速率峰值信号。在规定时间内反应介质中的抗体应将待测抗原全部结合，

无游离抗原存在，此时再次加入已知的相应抗原，该抗原与剩余游离抗体结合反应形成复

合物，可出现第二个速率峰值信号，表明第一次速率峰值信号是由全部的待测抗原产生，

可以此速率峰值计算待测抗原的量。如再次加入已知相应抗原后不出现第二速率峰值信

号，说明反应介质中已无游离抗体存在，第一速率峰值信号是由部分待测抗原产生，其测

定结果有不准确因素，提示应将待测样本进一步稀释，重新进行检测，以获取检测全部抗

原的真实浓度，保证检测的准确性。

14.单向琼脂扩散试验有那些影响因素?

答：单向扩散试验有下列影响因素： ① 抗血清的亲和力、特异性、及效价。要求亲和力强，特异性好、效价高。注意存放的方法，防止效价下降。 ② 标准曲线必须在每次测定时同时制作，绝不可一次作成，长期应用。 ③ 测定时必须加测质控血清，以保证定量的准确性。

④ 有时出现扩散环呈现两重的双环现象，这是出现了抗原性相同的两个组分，其扩散率不

同，例如α重链病血清中出现的α重链和正常的 IgA两种成分并存，皆与抗IgA 抗体发生反

应，就形成内外两重环。 ⑤ 在单扩试验时，有时回出现结果与真实含量不符，这主要出现在 Ig 测定中。如用单克隆抗体或骨髓瘤纯抗原免疫动物获得的抗血清，都存在单一结合价的现象，若用此作为单扩试剂测量正常人的多态性抗原，则抗体相对过剩，是沉淀圈直径变小，测量值降低。 ⑥ 测得假阳性升高现象与上面相反，如用多克隆抗体测定单克隆病，则抗原相对过剩(单一抗原决定簇) ，致使沉淀圈呈不相关扩大，从而造成某一成分的伪性增加。

15.沉淀反应可应用在那些方面?

答：沉淀反应主要应用于体液内包括血液、尿液、脑脊液、胸水、泪液、关节腔液等内的蛋

白质(如MW10000~50000，标本浓度为 1mg/L~100g/L)测定，应用最广泛的是可以准确定量

的免疫浊度法，也可用于药物的测定。

16.双向琼脂扩散试验的原理是什么?

答：双向琼脂扩散试验的原理为可溶性抗原和抗体在含有一定电解质的琼脂凝胶板的对应孔

中各自向对方扩散，在最适当的比例处形成抗原抗体沉淀线，根据沉淀线的位置、形状及对

比关系，可作出对抗原或抗体的定性分析。

五、论述题

1. 试对沉淀反应各类试验方法进行评价。

答：沉淀反应可分为单向免疫扩散试验、双向免疫扩散试验、絮状沉淀试验、免疫浊度测定

等试验。 (1)单向免疫扩散试验是一种稳定、简便、不需要特殊设备、一般试验室都可使用的常规方法。敏感性高，检测限为 1.25μg/ml。起其结果可经干燥、染色后长期保存。但该法需要时间较长，每次测定时须制作标准曲线比较麻烦。 (2)双向免疫扩散试验简单易行，结果可靠，特异性高，分辨率高于对流免疫电泳，成本低廉，结果可经染色干燥后长期保存;缺点是敏感性较低(如检测甲胎蛋白敏感度为 30μg/ml) ，扩散缓慢，不能精确定量。 (3)免疫浊度法①快速、检测不必等到抗原抗体反应达到平衡，而是在起始阶段测定，大大节约了反应时间，每小时可检测数十份标本。②敏感，最小检出量可达 ng 水平。③检测范围广，理论上任何能形成抗原抗体沉淀反应的物质均可用此法检测。 ④缺点是所用抗血清质量要求高，仪器须装电脑，价格较贵。 (4)絮状沉淀试验较实用、简便、不需要特殊设备、一般试验室都可使用，但须稀释标本比较麻烦。