2019年<临床检验初级检验技师考试>第十六章第一节生物学测定方法

第一节生物学测定方法

　　常见的生物学测定法包括：基于DNA检测的分子生物学测定法和生物活性测定法。

　　前者有细胞因子或细胞黏附分子DNA扩增法、RNA印迹法、原位杂交法、核酸酶保护分析等，可定性或定量分析细胞因子和细胞黏附分子的基因或mRNA。

　　后者则是根据细胞因子特定的生物活性而设计的检测方法，主要用于细胞因子的测定。

　　生物活性测定法的基本原理，是根据不同细胞因子所具有的某一方面独特的生物学活性，构建发挥这一活性的反应体系，通过观察其活性作用的结果，判断有无相应细胞因子的存在。

　　有助于细胞因子检测的活性作用大致有以下几类：

　　1.刺激细胞增殖或集落形成的活性;

　　2.维持细胞生长和存活的特性;

　　3.抑制细胞生长或破坏细胞的效应;

　　4.促进细胞趋化或抗病毒作用等。

　　一、促进细胞增殖和抑制细胞增殖测定法

　　1.直接计数法

　　2.细胞代谢活性测定方法

　　3.细胞代谢产物测定法

　　常用放射性核素掺入法和MTT比色法

　　二、细胞毒活性测定法

　　对指示细胞具有破坏作用的细胞因子，若与细胞共育将会导致细胞死亡。因此，待测细胞因子做一系列稀释后加至指示细胞培养体系，以检测培养细胞的死细胞数作为判断指标，死细胞数量与细胞因子的活性成正比。

　　本法常用于TNF等的测定。

　　三、抗病毒活性测定法

　　抗病毒活性测定法主要用于IFN等细胞因子的检测。

　　四、趋化活性测定法

　　其诱导细胞迁移的方式包括趋化性和化学增活性。

　　趋化性可采用琼脂糖和Boyden盲端微孔小室趋化试验测定。

　　化学增活性可采用琼脂糖小滴化学动力学试验测定。

　　五、生物学活性测定方法学评价

　　细胞因子生物学活性测定法主要具有以下特点：

　　1.敏感性较高

　　2.特异性不高

　　3.操作繁琐

　　4.易受干扰